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R&D IL-12 p70 ELISA 试剂盒

IL-12 p70 ELISA 试剂盒的身世告白


      在下名曰 IL-12 p70 ELISA 试剂盒,籍贯美国明尼苏达,承祖上 R&D Systems® 福荫,诞生在 ELISA 试剂盒界赫赫有名的 Quantikine® 家族,享有业界 ELISA 试剂盒金标准的美誉。精准定量,是亘古不变的使命。


IL12 p70,你就是我的唯一

       我们家族成员都是从一而终的「痴情种」,我的唯一是 Interleukin 12 (IL-12),别名自然杀伤细胞刺激因子(NKSF)、细胞毒性淋巴细胞成熟因子(CLMF),是由 p35 和 p40 两个亚基组成的 70-75KDa 异源二聚体糖蛋白。IL-12 对 T 细胞及 NK 细胞具有多重功能,包括刺激细胞毒性,与其它 IL-12 家族成员共同参与 CD4+ Th1 细胞的分化和增殖,以及促进 IFN-γ和 TNF 的生成[1,2]

 

IL-12 参与 Th1 分化过程,点击图片,了解分化过程中的关键因子

不少同学疑惑,在分析 IL-12 活性时,应该检测 IL-12 的异源二聚体形式(IL-12 p70),还是检测 p35 或 p40 亚基呢?一般来说推荐检测 IL-12 p70,原因有二:

  • p40 亚基也可以与 p19 亚基共同构成 IL-23,若检测 p40,除 IL-12 以外,同时也会检测到 IL-23。 

  • IL-23 与 IL-12 结构图[3]

  • 单独的 p40 或者 p35 亚基并没有 IL-12 的活性,且 p40 二聚体会与 IL-12 受体结合并成为 IL-12 的拮抗剂[4,5]

  •        R&D Systems® 的内部实验检测 NC37 细胞及人单核细胞,发现分泌的 p40 含量可以达到 IL-12 含量的几百倍(Table 1)。两者含量如此巨大的悬殊,对于免疫学检测 IL-12 来说是个挑战,如何避免与单体或二聚体 p40 发生交叉反应,检测试剂的特异性是关键。

           前面提到专一是我的特点,不管是 Human IL-12 p70 Quantikine®(货号 D1200,S1200,PD1200)ELISA 试剂盒,还是高灵敏 Human IL-12 p70 Quantikine® HS(货号 HS120,SS120,PHS120)ELISA 试剂盒,单克隆抗体(捕获抗体)可以特异性结合 IL-12 p70,而与 IL-12/IL-23 p40 等因子不产生交叉反应。

     

    Human IL-12 p70 Quantikins® ELISA Kit 的特异性检测,与图中因子无交叉反应


    家族的「魔鬼训练」

           欲戴王冠,必承其重。虽出生在 R&D Systems®,拥有高品质的纯正血统,生产我的主要原料(标准品、配对抗体、缓冲液)全部来自于 R&D Systems®,但我还是要经过家族的「魔鬼训练」,才能真正代表家族,走进大众视野。

  • 我所用的标准品蛋白参考 NIBSC/WHO 国际标准;且不同批次的标准品,都使用主校准标准品(Master calibrated standard)进行校正,确保批次间的一致性。

  • 精密度检测:板内精确度通过检测 3 份已知浓度样本中 IL-12 p70 各 20 次,计算 CV 值。板间精确度通过检测 3 种已知浓度样本各 20 份,并由至少三名技术人员完成操作,计算 CV 值。以 Human IL-12 p70 Quantikine® ELISA Kit 为例: 



  • 通过掺入回收实验和线性稀释实验评估基质效应,确保实验结果的准确度和精确度。

  • 掺入回收实验:将已知浓度人 IL-12 p70 蛋白掺入到三份基质中,并计算在不同基质中的回收率。以 Human IL-12 p70 Quantikine®  ELISA Kit 为例,


    线性稀释实验:样本分别掺入高浓度人 IL-12 p70 蛋白,并利用稀释液进行梯度稀释后检测其回收率,以 Human IL-12 p70 Quantikine®  ELISA Kit 为例,基本维持在 90~110% 之间。

     

  • 此外,还有我的兄弟——ELISA QC 质控品(货号:QC01-1),为实验体系提供准确的质量控制。 


  • 以下是我的代表作:


    更多兄弟成员,请查看:

    ◆ Products for IL-12 p70 

    ◆ IL-12 p70 ELISAs 

    ◆ IL-12 p70 Luminex Assays 

    ◆ IL-12 p70 Primary Antibodies


    References

    1. Wolf, S.F. et al. (1994) Stem Cells 12:154.

    2. Zeh, H.J. et al. (1994) in The Cytokine Handbook, 2nd edition, Thomson, A. editor, Academic Press, New York, p 239.

    3. Dario A.A. Vignali and Vijay K. Kuchroo. Nat Immunol. 2012 Aug; 13(8): 722–728.

    4. Gillessen, S. et al. (1995) Eur. J. Immunol. 25:200.

    5. Ling, P. et al. (1995) J. Immunol. 154:116.


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